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免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2024-10-15
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免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。
免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是一種經(jīng)典的生物化學(xué)技術(shù)，用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。其原理主要基于抗體和抗原之間的專一性結(jié)合作用。以下是對(duì)免疫共沉淀原理的詳細(xì)解釋：
一、基本原理
?抗體與抗原的專一性結(jié)合?：免疫共沉淀利用抗體能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合其對(duì)應(yīng)抗原的特性。這種專一性結(jié)合是免疫共沉淀技術(shù)的基礎(chǔ)。
?細(xì)胞裂解?：首先，細(xì)胞需要在非變性條件下被裂解，以保留細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用。這樣，原本在細(xì)胞內(nèi)相互結(jié)合的蛋白質(zhì)在裂解后仍然保持結(jié)合狀態(tài)。
?抗體與靶蛋白的結(jié)合?：將特異性的抗體加入到細(xì)胞裂解液中，抗體將與裂解液中的靶蛋白（即已知或待研究的蛋白質(zhì)）形成抗原-抗體復(fù)合物。
?復(fù)合物沉淀?：如果系統(tǒng)中存在與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)（稱為結(jié)合蛋白），這些結(jié)合蛋白也會(huì)與靶蛋白-抗體復(fù)合物結(jié)合，形成更大的蛋白質(zhì)復(fù)合物。隨后，通過離心或其他物理方法，可以將這些復(fù)合物沉淀下來。
二、實(shí)驗(yàn)步驟（簡(jiǎn)要）
?細(xì)胞裂解?：在非變性條件下裂解細(xì)胞，獲取細(xì)胞裂解液。
?抗體結(jié)合?：在細(xì)胞裂解液中加入特異性的抗體，使抗體與靶蛋白結(jié)合形成復(fù)合物。
?沉淀復(fù)合物?：通過離心或其他方法將蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀下來。
?洗脫與分析?：對(duì)沉淀物進(jìn)行洗脫，去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)，然后進(jìn)行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）及Western blotting等分析，以確定與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)。
